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| 品牌 | SOLARBIO/索萊寶 | CAS | 詳詢 |
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| 分子式 | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
| 分子量 | 詳詢 | 貨號 | BC5295 |
| 規格 | 100T/96S | 供貨周期 | 現貨 |
| 主要用途 | 植物根系活力檢測 | 應用領域 | 環保,化工,生物產業,農林牧漁,綜合 |
植物根系活力檢測試劑盒說明書
微量法
注意：本產品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作
貨號：BC529
規格：100T/96S
產品內容：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規格 | 保存條件 |
試劑一 | 液體10 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 液體110 mL×2瓶 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 液體2 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑四 | 液體20 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
標準品 | 液體2 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 試劑三：臨用前加入18 mL蒸餾水，充分混勻，現用現配。未用完的試劑2-8℃可以保存4周。
2、 標準品：0.4 mg/mL α-標準品。
產品說明：
根系是植物吸收水分和礦質營養的主要器官，同時又是植物體中重要物質如氨基酸、激素等物質合成、同化、轉化的器官，因此根的生長情況和活動能力直接影響植物個體的生長情況、營養水平和產量水平等，根系活力具有重要的實際意義。
植物根系能氧化吸附在根表面的α-，生成紅色的α-羥基-1-，沉淀于有氧化力的根的表面，使這部分染成紅色。α-在酸性條件下于對氨基 苯磺酸鈉和亞硝酸鹽作用生成紅色的偶氮染料。根系活力可以通過α-減少量來表示。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋/恒溫培養箱、可調式移液器、濾紙、微量玻璃比色皿/96孔板、蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
樣本的制備：將根部組織洗凈，去除根上的泥土，輕輕擦干，不要過分擠壓破壞根系細胞。稱取0.2g于5mL EP 管中。
二、測定步驟
1、 可見分光光度計/酶標儀預熱30min以上，調節波長至520nm，可見分光光度計用蒸餾水調零。
2、 標準品的稀釋：將0.4mg/mL α-標準品用試劑一稀釋為0.4、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125、0.0015625mg/mL的標準品。（0mg/mL記為標準空白管）
3、標準品稀釋表：
序號 | 稀釋前濃度（mg/mL） | 標準品體積（µL） | 試劑一體積（µL） | 稀釋后濃度（mg/mL） |
1 | 0.4 | 100 | - | 0.4 |
2 | 0.4 | 200 | 200 | 0.2 |
3 | 0.2 | 200 | 200 | 0.1 |
4 | 0.1 | 200 | 200 | 0.05 |
5 | 0.05 | 200 | 200 | 0.025 |
6 | 0.025 | 200 | 200 | 0.0125 |
7 | 0.0125 | 200 | 200 | 0.00625 |
8 | 0.00625 | 200 | 200 | 0.003125 |
9 | 0.003125 | 200 | 200 | 0.0015625 |
10 | 0 | - | 200 | 0（標準空白管） |
備注：下述實驗中每個標準管需75µL標準品（注意不要在此步驟直接檢測標準品吸光值）。
4、在5mLEP管按下表步驟加樣：
試劑名稱（μL） | 測定管 | 空白管 | 標準管 |
樣本 | 0.2g | - | - |
試劑二 | 2000 | 2000 | - |
37℃避光反應，在反應10min和3h 10min時測定管和空白管需要各吸取75μL反應液進行下述第二步反應。 第二步反應需要先按下表在新的1.5mL EP管中加入試劑三和試劑四，再吸取75μL上述第一步反應液于EP管中。注：需要先加試劑三和試劑四，再加反應液，一定不能顛倒順序！ | - | ||
試劑三 | 75 | 75 | 75 |
試劑四 | 75 | 75 | 75 |
第一步反應液 | 75 | 75 | - |
標準品 | - | - | 75 |
充分混勻，室溫顯色20min，取200μL于微量玻璃比色皿或96孔板中，測定在520nm處的吸光度，顯色后需要在20min內完成檢測。10min所對應的吸光值記作A1，3h10min所對應的吸光值記作A2。計算?A測定=A1測定-A2測定，?A空白=A1空白-A2空白，?A =?A測定-?空白，?A標=A標準-A標準空白管。（標準曲線和空白管只需做1-2次。）
三、根系活力計算
1. 標準曲線的繪制
根據標準管的濃度（x，mg/mL）和吸光度ΔA標（y，ΔA標），建立標準曲線。根據標準曲線，將ΔA（y，?A）帶入公式計算樣本濃度（x，mg/mL）。
2. 按照樣本質量計算：以氧化的α-的量來表示根系活力
根系活力 [ μg / (g·h) ]=x×V試劑二×103÷(W×T)=666.67×x÷W
103：單位換算，1mg/mL=103μg /mL；V試劑二：試劑二的體積，2mL；W：根系質量，g；T：反應時間，3h。
注意事項：
1、 在EP管/96孔板內加入試劑三、試劑四以及樣本的順序不可改變。
2、 如果?A結果不在標準曲線范圍內，可以減少樣本質量（或者減少第一步反應時間）或者增加樣本質量（或者增加第一步反應時間）。
3、 顯色后需要在20min內完成檢測。
實驗實例：
1、 稱取0.2081g豆芽的根部，洗凈，擦干，按照測定步驟操作，用96孔板測得計算?A測定=A1測定-A2測定=1.449-1.328=0.121，?A空白=A1空白-A2空白=1.555-1.487=0.068，?A =?A測定-?A空白=0.121-0.068=0.053，標準曲線為y=3.2172x+0.0031，計算得x=0.016mg/mL,帶入公式計算：
根系活力 [ μg / (g·h) ] = 666.67×x÷W=51.25 μg / (g·h)
2、 稱取0.2031g景天的根部，洗凈，擦干，按照測定步驟操作，用96孔板測得計算?A測定=A1測定-A2測定=1.517-1.424=0.093，?A空白=A1空白-A2空白=1.555-1.487=0.068，?A =?A測定-?A空白=0.093-0.068=0.025，標準曲線為y=3.2172x+0.0031，計算得x=0.007mg/mL,帶入公式計算：
根系活力 [ μg / (g·h) ] = 666.67×x÷W=22.98 μg / (g·h)
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