NADP-蘋果酸脫氫酶（NADP-MDH）活性檢測試劑盒說明書
紫外分光光度法
貨號：BC1050
規格：50T/48S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑二：臨用前加入250 μL雙蒸水，用不完的試劑仍-20℃保存；

2. 試劑三：臨用前加入300 μL雙蒸水，用不完的試劑仍-20℃保存。

產品說明：
MDH （EC 1.1.1.37）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，線粒體中MDH是TCA循環的關鍵酶之一，催化蘋果酸形成草酰乙酸；相反，胞漿中MDH催化草酰乙酸形成蘋果酸。草酰乙酸是重要的中間產物，連接多條重要的代謝途徑。因此，MDH在細胞多種生理活動中扮演著重要的角色，包括線粒體的能量代謝、蘋果酸-天冬氨酸穿梭系統、活性氧代謝和抗病性等。根據不同的輔酶特異性，MDH分為NAD^-依賴的MDH和NADP^-依賴的MDH，NADP-MDH主要存在于真核細胞中。
NADP-MDH催化NADPH還原草酰乙酸生成蘋果酸，導致340nm處光吸收下降。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、可調節移液器、1mL石英比色皿、研缽/勻漿器、蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產品資料"附件

注意事項：

1. 樣本的提取必須在0℃-4℃中操做完成，以防止酶變性失活。

2. 實驗時，試劑二、試劑三和樣本在冰上放置，以免變性和失活。試劑一37℃放置。

3. 建議一人加樣一人比色。盡量保持反應溫度為37℃。

實驗實例：

1. 取0.1g大鼠心臟組織加入1mL提取液進行勻漿研磨，取上清后按照測定步驟操作，測得計算ΔA測定管=A1測定-A2測定=0.694-0.628=0.066，ΔA空白管=A1空白-A2空白=0.652-0.643=0.009，ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管=0.057，按樣本鮮重計算酶活得：

NADP-MDH（U/g 鮮重）=6430×ΔA÷W=6430×0.057÷0.1=3665.1 U/g 鮮重。
參考文獻：

1. Yao Y X, Li M, Zhai H, et al. Isolation and characterization of an apple cytosolic malate dehydrogenase gene reveal its function in malate synthesis[J]. Journal of plant physiology, 2011, 168(5): 474-480.

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