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| 品牌 | SOLARBIO/索萊寶 | CAS | 詳詢 |
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| 分子式 | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
| 分子量 | 詳詢 | 貨號 | BC0555 |
| 規格 | 100T/96S | 供貨周期 | 現貨 |
| 主要用途 | 脂肪酸合成酶(FAS)活性檢測 | 應用領域 | 環保,化工,生物產業,農林牧漁,綜合 |
微量
注意：本產品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC0555
規格：100T/96S
產品內容：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規格 | 保存條件 |
提取液 | 液體110 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 粉劑×2支 | -20℃保存 |
試劑二 | 粉劑×2支 | -20℃保存 |
試劑三 | 液體20 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑四 | 粉劑×2支 | -20℃保存 |
溶液的配制：
1. 試劑一：臨用前取一支加入1 mL試劑三，充分溶解，用不完的試劑分裝后-20℃保存2周，禁止反復凍融。
2. 試劑二：臨用前取一支加入1 mL試劑三，充分溶解，用不完的試劑分裝后-20℃保存2周，禁止反復凍融。
3. 試劑四：臨用前取一支加入0.5 mL試劑三，充分溶解，用不完的試劑分裝后-20℃保存2周，禁止反復凍融。
產品說明：
脂肪酸合成酶（Fatty acid synthetase，FAS）是一種關于脂肪酸再生能力并起重要作用的限速酶，它通過催化丙二酰輔*A、乙酰輔*A和NADPH生成長鏈脂肪酸和NADP+，NADPH在340nm條件下有特征吸收峰。通過檢測340nm條件下吸光值的下降速率，可以計算出FAS活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計/酶標儀、水浴鍋/恒溫培養箱、低溫離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研缽/勻漿器/超聲波細胞破碎儀、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
1、細菌、細胞樣本的制備：按照細胞數量（104個）: 提取液體積（mL）為500~1000 : 1的比例（建議500萬細胞加入1 mL提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300W，超聲3秒，間隔9秒，總時間5 min）；于4℃，
12000 g離心20 min，取上清液，置于冰上待測。
2、組織樣本的制備：按照質量（g）: 提取液體積(mL)為1: 5~10的比例（建議稱取約0.1 g組織，加入1mL
提取液）加入提取液，冰浴勻漿后于4℃，12000 g離心20 min，取上清液，置于冰上待測。
3、血清（漿）等液體樣本：直接測定
二、測定步驟
1、 紫外分光光度計/酶標儀預熱30 min以上，調節波長至340 nm，蒸餾水調零。
2、 試劑三臨用前置于37℃保溫15min。
3、 加樣表（在96孔UV板或者微量石英比色皿中加入下列試劑）
試劑名稱 | 測定管 | 空白管 |
上清液 | 20 | - |
蒸餾水 | - | 20 |
試劑一 | 16 | 16 |
試劑二 | 16 | 16 |
試劑三 | 140 | 140 |
試劑四 | 8 | 8 |
迅速吹打混勻，記錄第15s的吸光值A1測定（A1空白），和1min15s時的吸光值A2測定（A2空白），計算ΔA =（A1測定-A2測定）-（A1空白-A2空白）。 空白管只需測定1-2次，如果樣本數量過多也可以將試劑一到試劑四按上述比例混勻配制成工作液進行測定。 | ||
三、FAS活性計算
a. 使用微量石英比色皿測定的計算公式
（1）按照蛋白濃度計算
單位定義：在37℃條件下，每毫克蛋白每分鐘氧化1 nmol NADPH為1個酶活單位。
FAS (U/mg prot) =[ΔA÷(ε×d)×V反總×109] ÷(Cpr×V樣)÷T=1607.7×ΔA÷Cpr
（2）按照樣本質量計算
單位定義：在37℃條件下，每克組織每分鐘氧化1 nmol NADPH為1個酶活單位。
FAS (U/g 質量) =[ΔA÷(ε×d)×V反總×109]÷(W×V樣÷V樣總)÷T=1607.7×ΔA ÷W
（3）按細胞數量計算
單位定義：在37℃條件下，每104個細胞每分鐘氧化1 nmol NADPH 為1個酶活單位。
FAS (U/104 cell) =[ΔA÷(ε×d)×V反總×109]÷(N×V樣÷V樣總)÷T=1607.7×ΔA ÷N
（4）按液體體積計算
單位定義：在37℃條件下，每毫升樣本每分鐘氧化1 nmol NADPH為 1個酶活單位。
FAS (U/mL) =[ΔA÷(ε×d)×V反總×109]÷V樣÷T=1607.7×ΔA
ε：NADPH 摩爾消光系數，6.22×103 L/mol/cm；d：比色皿光徑，1 cm；V反總：反應體系總體積，2×10-4L；Cpr：上清液蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；V樣：加入反應體系中上清液體積，20 μL=0.02 mL；V樣總：提取液體積，1 mL；T：反應時間，1 min；N：細胞數量，萬個（以萬計）；109：換算系數，1mol=109 nmol。
b. 使用96孔UV板測定的計算公式
（1）按照蛋白濃度計算
單位定義：在37℃條件下，每毫克蛋白每分鐘氧化1 nmol NADPH為1個酶活單位。
FAS (U/mg prot) =[ΔA÷(ε×d)×V反總×109] ÷(Cpr×V樣)÷T=2679.5×ΔA÷Cpr
（2）按照樣本質量計算
單位定義：在37℃條件下，每克組織每分鐘氧化1 nmol NADPH為1個酶活單位。
FAS (U/g 質量) =[ΔA÷(ε×d)×V反總×109]÷(W×V樣÷V樣總)÷T=2679.5×ΔA ÷W
（3）按細胞數量計算
單位定義：在37℃條件下，每104個細胞每分鐘氧化1 nmol NADPH 為1個酶活單位。
FAS (U/104 cell) =[ΔA÷(ε×d)×V反總×109]÷(N×V樣÷V樣總)÷T=2679.5×ΔA ÷N
（4）按液體體積計算
單位定義：在37℃條件下，每毫升樣本每分鐘氧化1 nmol NADPH為 1個酶活單位。
FAS (U/mL) =[ΔA÷(ε×d)×V反總×109]÷V樣÷T=2679.5×ΔA
ε：NADPH 摩爾消光系數，6.22×103 L/mol/cm；d：96孔板，0.6 cm；V反總：反應體系總體積，200 μL=2×10-4L；Cpr：上清液蛋白質濃度，mg/mL；W：樣品質量，g；V樣：加入反應體系中上清液體積，20 μL=0.02 mL；V樣總：提取液體積，1 mL；T：反應時間，1 min；N：細胞數量，萬個（以萬計）；109：換算系數，1mol=109nmol。
注意事項：
1、提取液中含有BSA（約2mg/mL），測定上清液蛋白濃度時需要減去提取液中蛋白濃度。
2、如果測定吸光值＞1.5或ΔA＞0.5，建議用蒸餾水稀釋樣本后再進行測定，計算公式中乘稀釋倍數。如果測定吸光值較小，建議加大樣本量后再進行測定。
實驗實例：
取0.1 g小鼠肝臟加入1 mL提取液進行冰浴勻漿。12000 g 4℃離心20 min，取上清置冰上，之后用石英微量比色皿按照測定步驟操作，測得計算ΔA =（A1測定-A2測定）-（A1空白-A2空白）= （1.1783-1.0945）-（0.5653-0.5593）=0.0778，按樣本質量計算酶活得：
FAS(U/g 質量) =1607.7×ΔA ÷W=1251 U/g質量。
參考文獻：
[1] Robinson J D, Bradley R M, Brady R O. Biosynthesis of Fatty Acids[J]. Journal of Biological Chemistry, 1960, 238(2).
[2] Tcl B. Purification and crystallization of rat liver fatty acid synthetase[J]. Archives of Biochemistry & Biophysics, 1981, 209(2):613-619.
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